液相色譜柱正確安裝、啟用與維護!
色譜柱是液相色譜儀的最核心部件,價格相對昂貴,如避免強烈的碰撞和震動,不要讓柱床變干,避免在嚴寒環(huán)境受凍等。
1、色譜柱安裝、啟用和維護
柱頭類型和不銹鋼毛細管接頭的匹配
色譜柱是消耗品,不是儀器原配的情況很多。如果接頭和柱頭深度不匹配將會產(chǎn)生漏液或者死體積過大的現(xiàn)象。接頭比柱頭深度長,不易擰緊而漏液;接頭比柱頭深度短,柱頭內(nèi)留有空隙而產(chǎn)生死體積,使譜帶展寬和峰拖尾。
2、溶劑的匹配轉(zhuǎn)換
色譜柱內(nèi)保存溶劑和儀器系統(tǒng)內(nèi)存留溶劑,如果和流動相不匹配,使用前需進行轉(zhuǎn)換。特別是流動相含緩沖鹽時,如保存溶劑是純有機相或有機相比例高,直接將新柱接入使用,會導致緩沖鹽在柱內(nèi)結晶析出,最嚴重會將新柱永久不可逆地損壞。正相柱保存溶劑一般為正己烷,如果要轉(zhuǎn)換成HILIC柱模式使用,由于正己烷和甲醇乙腈的互溶性不好,轉(zhuǎn)換中間需用二氯甲烷或乙酸乙酯過渡。
3、正確使用緩沖鹽
緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有機溶劑,因此緩沖鹽使用不當會使其析出,堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙,使填料板結,柱壓上升;同時阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展,使色譜柱的保留能力下降,柱效降低。緩沖鹽析出后,去除非常困難,因此,正確的使用緩沖鹽對延長色譜柱使用壽命非常重要。
4、新柱使用前的平衡和老化
廠家出廠檢驗時一般都已進行過平衡,但色譜柱到最終用戶時間不一,用戶正式測定前最好對色譜柱再次平衡。最好的平衡兼老化一起進行的方法是運行幾次完整的分析程序(包括進樣),直到觀察到峰形、保留時間和峰面積穩(wěn)定為止。所謂“老化”是借用了氣相的術語,目的是達到分析物在色譜柱以及整個液相系統(tǒng)流路中的吸附飽和。對某些特定的待測物,如分子量大于1000的,因擴散速度慢,老化時間相應要長,可采取大濃度進樣或在同一個洗脫周期內(nèi)連續(xù)進樣多針的方式加快老化。
5、pH使用范圍
一般認為硅膠基質(zhì)柱子的pH使用范圍是2-8,這是很粗略的。硅膠類型、使用溫度、硅膠表面所鍵合的固定相類型以及緩沖鹽的不同,對此均有影響。硅膠比孔容小、鍵合密度大的填料pH耐受范圍要大一些,有些選用高品質(zhì)硅膠,加上高密度鍵合和雙封尾,或特殊工藝使pH耐受范圍最大提高到10。磷酸鹽緩沖鹽滲透力強,有加快硅膠溶解的副作用,它的存在會降低pH使用范圍。有機雜化硅膠以及硅膠表面涂覆雜化層的硅膠填料,有機質(zhì)的存在使pH使用范圍能到12以上。拿到柱子第一時間閱讀說明書,確認色譜柱內(nèi)的封存液,有條件可以依照COA報告做柱效測試。
6、色譜柱保存
短期保存(隔夜或隔周末)用所用的流動相(不含緩沖鹽)保存為佳,以盡量減少下次使用的平衡時間。一般只建議在長期保存反相柱的時候用純甲醇或乙腈,一方面純有機相保存有最大限度減少鍵合相水解的作用,但純甲醇(乙腈)又會將已水解而暫時吸附在柱內(nèi)的鍵合相洗脫出去,使固定相流失進程加快,壽命縮短。純有機相保存還有易揮發(fā)使柱床變干的缺點,使用80%左右有機相保存也屬好的選擇,且足以避免長菌。強烈建議在柱身上貼標簽標明保存溶劑。
離子交換柱和水性SEC柱等適合保存在水溶液中的色譜柱,可加0.05%疊氮化鈉溶液防止長菌。
正相柱,無論是短期還是長期,都推薦保存在所用流動相中。