薄層色譜儀的定性依據(jù)主要是根據(jù)待測(cè)組分的Rf值和純品的Rf值對(duì)照定性。將待測(cè)物質(zhì)與一性質(zhì)相近的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在同一薄層上點(diǎn)樣，于同一條件下展開(kāi)、顯色，根據(jù)測(cè)得的相對(duì)Rf值進(jìn)行確證。如果它們的Rf值一樣，則表示待測(cè)組分就是這個(gè)純物質(zhì)。為了考查其定性的準(zhǔn)確性，常常將制成的板點(diǎn)樣后，在不同的展開(kāi)劑中展開(kāi)，如果所得到的尺f值都一樣，就可靠地證明它們是同一物質(zhì)。有時(shí)為了進(jìn)一步確證待測(cè)物，可將斑點(diǎn)從硅膠上洗脫下來(lái)，用其他方法進(jìn)行定性鑒定。

薄層色譜儀定量分析方法

1．目視比較法

取標(biāo)準(zhǔn)物配制系列濃度的試樣，將樣品與標(biāo)準(zhǔn)物試樣在同一薄層板上點(diǎn)樣 ( 點(diǎn)樣體積相同 ) ，展開(kāi)，顯色后用目視的方法比較樣品斑點(diǎn)和標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)面積大小和顏色深淺，取與標(biāo)樣zui接近的斑點(diǎn)，按標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的含量進(jìn)行定量計(jì)算，誤差為±10％。

2．洗脫法

洗脫法是將展開(kāi)后被分離化合物斑點(diǎn)區(qū)的吸附劑從薄層板上剝離下來(lái)，再用適當(dāng)?shù)娜軇┤芙猓崛〕霰环蛛x的化合物，然后用其他的含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定。常用的測(cè)定方法有分光光度法，其他如質(zhì)譜法、庫(kù)侖滴定法、氣相色譜法和液相色譜法等也有應(yīng)用。

3．斑點(diǎn)面積測(cè)量法

面積法是根據(jù)薄層板上斑點(diǎn)面積與物質(zhì)濃度的關(guān)系，直接進(jìn)行含量測(cè)定的一種方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明。斑占樣品質(zhì)量的對(duì)數(shù) ( 1gm ) 與斑點(diǎn)面積的平方根．屑成線性關(guān)系．

(1) 稀釋未知樣品法  在同一塊薄層板上，點(diǎn)3個(gè)樣品點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)樣品點(diǎn)，未知濃度樣品點(diǎn)，稀釋到一定倍數(shù)的未知樣品點(diǎn)。正常展開(kāi)顯色后，測(cè)量相應(yīng)斑點(diǎn)面積 ( 相對(duì)值 ) 。

(2) 稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液法  在同一塊薄層板上點(diǎn)3個(gè)樣品點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)樣品點(diǎn)，稀釋到一定倍的標(biāo)準(zhǔn)樣品點(diǎn)，未知濃度樣品點(diǎn)。正常展開(kāi)顯色后，測(cè)量相應(yīng)的斑點(diǎn)面積 ( 相對(duì)值 ) ，優(yōu)為所求未知物質(zhì)量。

斑點(diǎn)面積的測(cè)量可采用一張半透明的繪圖紙，覆蓋在薄層上，描出斑點(diǎn)的面積，再將紙移到方格坐標(biāo)紙上，讀出斑點(diǎn)所占的格數(shù)，測(cè)量每格的面積 ( 約0.25cm×0.25cm ) ，即司計(jì)算出斑點(diǎn)的總面積。誤差為±5％。

4．掃描光密度法（薄層色譜掃描儀法）

掃描光密度法是直接用儀器在薄層板上測(cè)定斑點(diǎn)的顏色深度或熒光強(qiáng)度的一種方法。由于它的分離效率和測(cè)定靈敏度高、準(zhǔn)確、快速，現(xiàn)已成為薄層定量的主要方法。薄層掃描定量方法可分為吸收測(cè)定法和熒光測(cè)定法。吸收測(cè)定法又可分為透射法和反射法。透射法是使光束照到薄層斑點(diǎn)上，測(cè)量透射光強(qiáng)度；反射法是使光束照到薄層斑點(diǎn)上，測(cè)量反射光的強(qiáng)度。凡被測(cè)組分有熒光或經(jīng)適當(dāng)處理后能生成熒光化合物時(shí)，均可進(jìn)行熒光測(cè)定。可用氙燈或汞燈作紫外光源，測(cè)定時(shí)可選擇適宜的激發(fā)光和熒光波長(zhǎng)。