液相色譜儀紫外檢測器工作原理及應(yīng)用
紫外檢測器是液相色譜儀中應(yīng)用最廣泛的檢測器,當(dāng)檢測波長范圍包括可見光時,又稱為紫外-可見檢測器。紫外吸收檢測器不僅靈敏度高、噪音低、線性范圍寬、有較好的選擇性,而且對環(huán)境溫度、流動相組成變化和流速波動不太敏感,因此可用于對光吸收小、消光系數(shù)低的物質(zhì)進(jìn)行微量分析。既可用于等度洗脫,也可用于梯度洗脫。紫外檢測器對流速和溫度均不敏感,可于制備液相色譜儀。其中要注意流動相中各種溶劑的紫外吸收截止波長,如果溶劑中含有吸光雜質(zhì),則會提高背景噪音,降低靈敏度。此外,梯度洗脫時,還會產(chǎn)生漂移。
紫外檢測器的工作原理是:當(dāng)一束單色光透過流動池時,若流動相不吸收光,則吸收度A與吸光組分的濃度C和流動池的光徑長度L成正比。其依據(jù)是光吸收定律,從光源發(fā)出的光經(jīng)狹縫、濾光片、樣品池到光電培增管上,使束由于樣品濃度不同所引起光強(qiáng)的變化轉(zhuǎn)換成光電流的變化,此光電流經(jīng)放大器輸入到對數(shù)轉(zhuǎn)換器,使透光率T轉(zhuǎn)成A輸出。根據(jù)上式就知測出了A,就知樣品濃度C。若從放大器直接輸入記錄儀,繪出的是樣品透光率T變化的圖譜,若從對數(shù)轉(zhuǎn)換器輸入到記錄儀繪出的是樣品光密度A變化的圖譜。
紫外檢測器分為固定波長檢測器、可變波長檢測器和光電二極管陣列檢測器。按光路系統(tǒng)來分,紫外檢測器可分為單光路和雙光路兩種。可變波長檢測器又可分單波長(單通道)檢測器和雙波長(雙通道)檢測器。PDAD是80年代出現(xiàn)的一種光學(xué)多通道檢測器,它可以對每個洗脫組分進(jìn)行光譜掃描,經(jīng)計(jì)算機(jī)處理后,得到光譜和色譜結(jié)合的三維圖譜。其中吸收光譜用于定性(確證是否是單一純物質(zhì)),色譜用于定量。常用于液相色譜儀對復(fù)雜樣品(如生物樣品、中草藥)的定性定量分析。
在使用紫外檢測器分析檢測時需注意以下事項(xiàng)以保證檢測器的靈敏度:
1.氘燈的光強(qiáng)受溫度和電壓影響較大,譜析科學(xué)儀器公司建議在恒溫室內(nèi)工作或者在冰庫里工作;
2.T調(diào)零生產(chǎn)時機(jī)內(nèi)已校準(zhǔn),當(dāng)更換光電培增管后,需重新校準(zhǔn);
3.氘燈壽命可達(dá)數(shù)千小時,若發(fā)現(xiàn)記錄儀不能調(diào)到10mV,且基線一直往小的方向漂移要考慮換燈。如氘燈不亮可再按一次電源開關(guān),氘燈就會即亮,光電培增管壽命在數(shù)千小時以上。
山東譜析科學(xué)儀器有限公司色譜工程師特別提醒:注意液相色譜儀開機(jī)工作時不得拿出樣品池架,以免強(qiáng)光照射光電培增管造成損壞。氘燈發(fā)光區(qū)域和光電培增管光陰極窗口沾污時,可用干凈棉芯酒精擦拭干凈。