高效液相色譜儀示差折光檢測器測定甘蔗中三種水溶性糖含量
2020-02-07 09:54:37來源：admin
甘蔗是我國最重要的糖料作物，它不僅是食糖業的重要原料，而且是能源、化工、釀酒和飼料的原料。甘蔗節間含有大量的糖分，主要有葡萄糖、果糖和蔗糖這三種糖類碳水化合物。無論是感官還是研究表明，甘蔗在不同生長時期、不同節間糖分含量存在較大差異。因此分析測定甘蔗不同時期、不同節間糖含量，分析多種糖分生長積累的規律，進而運用統計分析的方法了解蔗糖分積累與糖代謝相關酶活性變化之間的關系，從生長機理各個方面探討研究甘蔗生長過程和糖分積累的規律，并為甘蔗高產高糖栽培及遺傳改良等提供理論上的依據。
糖含量的測定方法有化學比色法、旋光法、氣相色譜法和液相色譜法。一般化學法只能測定各種糖的總量而不能分別測定各種糖的含量，并且有研究表明，測得的葡萄糖、果糖值比實際值略高而存在偏差，極有可能影響甘蔗品質的判斷。氣相色譜法雖可分別測定不同糖的含量，靈敏度高，但是由于糖類化合物沸點高，難以汽化，必須進行衍生化反應才可檢測，樣品處理、分析檢測步驟較為繁瑣，且認為干擾誤差較大。
譜析色譜實驗室，采用本公司生產的LC-3000高效液相色譜儀分析檢測蜂蜜、菠蘿、馬鈴薯等中不同糖類碳水化合物含量，已在實際應用中取得良好的分析效果，得到客戶的肯定。目前，甘蔗節間糖類碳水化合物含量測定目前報道主要采用一般的化學方法。譜析儀器公司充分吸收國內外相關研究方案，對分析條件進一步優化，采用碳水化合物分析專用色譜柱對甘蔗節間糖分進行分離分析，建立一種簡便、快速和準確可靠的，能同時測定果糖、葡萄糖、蔗糖含量的高效液相色譜儀分離法。
1.儀器與試劑
高效液相色譜儀LC-3000（山東譜析），示差折光檢測器，針孔進樣器。葡萄糖、果糖、蔗糖標樣為國產色譜純(純度均不低于99.5%)，乙腈為色譜純，實驗用水為超純水。
2.色譜分析條件
色譜柱：Agilent Zorbax carbohydrate柱(4.6mm×250mm，5.0μm)；流動相為乙腈-水(75:25，V/V)；柱溫30℃；檢測池溫度35℃；流速1.0mL/min，進樣量20μL。
3.糖標準溶液的配制
準確稱取果糖、葡萄糖、蔗糖各2.0g(精確到0.0001g)，轉移至100mL容量瓶中，用高純水定容至刻度，得到各自質量濃度均為20mg/mL的混標溶液。逐級稀釋至10、5、2.5、1.25、0.625mg/mL。上機進樣分析前經0.45μm微孔濾膜過濾。每個樣品重復3次。
4.樣品處理
將冷凍的節間樣品去皮，切碎，在液氮中磨成粉末狀，精確稱取樣品粉末1.00g(精確到0.0001g)，加入80%的乙醇5mL，80℃恒溫水浴30min后，12000r/min離心20min，取上清液，殘渣加入5mL 80%的乙醇溶液重復提取1次，合并提取上清液，90℃水浴中蒸干乙醇，加入高純水定容至5mL，混勻后用一次性注射器抽取提取樣液，經0.45μm微孔濾膜過濾后以備上機進樣分析。每個樣品重復3次。
譜析分析結果表明，采用高效液相色譜儀分析甘蔗節間果糖、葡萄糖、蔗糖，保留時間重現性好，三者的含量和峰面積比值之間呈良好的線性關系，相對標準偏差較好，加標回收率準確度較高，是一種檢測分析甘蔗節間糖分組成和含量的簡便、快速、準確的方法。如有相關分析需求請與山東譜析科學儀器有限公司0632-5571618聯系，亦可登錄公司網站在線即時了解咨詢。
