血液中乙醇含量頂空氣相色譜法測定 目的 建立檢測血液中乙醇含量簡便、準(zhǔn)確的方法。方法 以叔丁醇作為內(nèi)標(biāo)，用頂空氣相色譜火焰離子化檢測器對樣品進(jìn)行檢測，與平行操作的乙醇標(biāo)準(zhǔn)品比較，用內(nèi)標(biāo)法以乙醇對內(nèi)標(biāo)物的峰面積比進(jìn)行定量。結(jié)果色譜圖上目標(biāo)峰與內(nèi)標(biāo)峰分離完全，在0.01～10.0 g/L范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線線性關(guān)系良好。頂空氣相色譜法測定血液中乙醇含量快速靈敏，能準(zhǔn)確定量，該方法可用于實(shí)際檢測分析。 

血液中乙醇濃度的高低,是判定一個(gè)人清醒程度的重要指標(biāo)。目前國內(nèi)大多采用國標(biāo)法測定,即重鉻酸鉀氧化硫酸亞鐵銨滴定法。該法花費(fèi)時(shí)間長,條件不易控制。由于血液中含有各種蛋白質(zhì)和膠狀物質(zhì)，比較黏稠,因此不能采用直接氣相色譜法測定。山東譜析儀器公司采用頂空氣相色譜法，通過對待檢血樣進(jìn)行適當(dāng)處理和色譜條件的摸索，從而對實(shí)驗(yàn)方法有所改進(jìn)。

1 材料和方法 

1.1 主要儀器 GC-17型氣相色譜儀（山東譜析科學(xué)儀器有限公司），AHS-6890A半自動(dòng)頂空進(jìn)樣器，N2010色譜工作站。 

1.2 試劑 空白抗凝血，無水乙醇(色譜純)，叔丁醇（色譜純，內(nèi)標(biāo)物）。 

1.3 試劑配置 

1.3.1 乙醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 用移液器分別準(zhǔn)確吸取無水乙醇1.26 ml（相對密度0.7893）、叔丁醇1.24 ml（相對密度0.803 7）于100 ml容量瓶中,用重蒸水稀釋至刻度,混勻，分別得濃度為10 g/L的乙醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。置4℃冰箱保存（可保存1年） 

1.3.2 乙醇標(biāo)準(zhǔn)工作液、叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)工作液 分別吸取一定量的乙醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用蒸餾水稀釋10倍，分別得濃度為1 g/L的乙醇標(biāo)準(zhǔn)工作液和叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)工作。

1.4 色譜條件和頂空條件 色譜柱 毛細(xì)管色譜柱，柱溫80℃，檢測室溫度220℃，進(jìn)樣溫度200℃. 頂空樣品溫度80℃，閥體溫度90℃，樣品管路溫度90℃。 

1.5 樣品制備 精確吸取2份待測全血0.5 ml，分別加入樣品瓶中,加100 μl(1 g/L)叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)工作液作為內(nèi)標(biāo)，用密封鉗加封鋁帽，密封好瓶塞,混勻，放入DK-300頂空進(jìn)樣器加熱位里面。 另取空白全血2份，根據(jù)待測血液中乙醇含量的多少（目測乙醇峰面積的大小），添加相應(yīng)的乙醇標(biāo)準(zhǔn)工作液（20 μg～2 mg），內(nèi)標(biāo)液按上述方法平行操作，作為已知對照。 

1.6 樣品檢測 按下頂空進(jìn)樣按鍵，儀器自動(dòng)負(fù)壓吸取樣品進(jìn)氣相色譜分析，同時(shí)頂空進(jìn)樣器給色譜工作一個(gè)采樣信號，色譜工作站開始記錄色譜數(shù)據(jù)。每個(gè)試樣進(jìn)樣2次。 

1.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 將10 g/L的乙醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用重蒸水分別稀釋10、100、1000倍，得濃度分別為1、0.1、0.01 g/L的乙醇標(biāo)準(zhǔn)液，然后分別取0.05、0.1、0.2、0.4 ml的1 g/L乙醇標(biāo)準(zhǔn)液，0.1、0.2 ml的0.1 g/L乙醇標(biāo)準(zhǔn)液，0.1、0.2 ml的0.01 g/L乙醇標(biāo)準(zhǔn)液，同時(shí)加入0.2 ml的1 g/L叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)工作液做內(nèi)標(biāo)，檢測后制作標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。 

1.8 記錄與計(jì)算 記錄檢材及已知對照中乙醇及內(nèi)標(biāo)峰面積值，填入GC定量分析記錄表中，并計(jì)算出各檢材中乙醇及內(nèi)標(biāo)的平均峰面積。表1 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線相關(guān)數(shù)據(jù) 乙醇添加量理論計(jì)算的乙醇濃度根據(jù)表1的數(shù)據(jù)，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程及相關(guān)系數(shù)： y=1.4062x+0.0268，r＝0.999 計(jì)算檢材中醇含量W(g/100 ml) W=f×檢材中的醇峰面積平均值×內(nèi)標(biāo)添加量（μg）×100檢材中內(nèi)標(biāo)峰面積平均值×檢材量×1000 f=空白檢材中醇添加量×內(nèi)標(biāo)峰面積平均值空白檢材中內(nèi)標(biāo)添加量×醇峰面積平均值 計(jì)算相對相差（用來檢驗(yàn)平行操作的穩(wěn)定性及數(shù)據(jù)的可靠性）： 相對相差（%）=｜W1-W2｜W×100 式中W1、W2為2份檢材平行定量測定的結(jié)果，W為2份檢材平均值。 

2 結(jié) 果 

2.1 測定的色譜圖  該條件下目標(biāo)峰與內(nèi)標(biāo)分離完全，（3.39±0.5）min處為乙醇目標(biāo)峰，（10.0±0.5）min處為內(nèi)標(biāo)峰。 

2.2 線性關(guān)系 在確定的最佳試驗(yàn)條件下,對不同濃度的乙醇標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行測定,其回歸方程為y=1.4062x＋0.0268,r=0.999。在乙醇濃度為0.01～10.0 g/L范圍內(nèi)，血液中乙醇含量與相應(yīng)的峰面積值呈良好的線性關(guān)系，測定限為0.01 g/L。